凍卵愛生育，幸福愛延續 - 送子鳥生殖中心 / 愛生育銀行

在新進國家中，許多女性基於升學或事業的需要，使得她們選擇晚婚並將生育計畫延後。除此之外，一些癌症病患在進行腫瘤治療前，也需要保有她們的生育能力。因此這些女性是需要一個可靠的冷凍保存卵子技術來儲存卵子；或者提供生殖細胞銀行，讓失去卵巢功能的婦女能夠獲得捐贈卵子的另一個選擇，並縮短受贈夫妻的等待時間。

但就目前為止，卵子的冷凍技術並不穩定。統計上，藉由慢速冷凍解凍結合顯微受精術達成的懷孕率相當低，然而為了要將懷孕率提升，已有許多方式逐漸被改進並發表，但提昇效果卻也有限。在一般人工生殖臨床的懷孕率為 20.6%，但卵子解凍後的懷孕率僅為 2.3%，而著床率更只有 10.1%。

技術上，卵子冷凍逐漸由慢速冷凍發展至玻璃化冷凍。最初，利用高黏稠度與高濃度的冷凍保護液，讓小鼠胚胎瞬間達到玻璃化的凝固狀態，並將冷凍降溫速率控制在-15,000~ -30,000℃，以達到抑制冰晶的形成。現在這個無冰晶形成的冷凍技術已經應用在人類生殖技術上。但是玻璃化冷凍技術有兩項缺點：1. 高濃度的冷凍保護劑會對生殖細胞造成毒性。2. 若在冷凍過程中，降溫速率未達成時，可能發生細胞內冰晶形成而造成不可逆的冷凍傷害。為了克服這些問題，有數種技術逐漸被發展出來，如利用經設計過的冷凍載具，可有效降低檢體的體積至 1μL，進而加快冷凍降溫速率，目前已成功的應用於人類上。

在 2000 年時，Kuwayama 設計發明了 cryotop（圖一），構成了透明且成薄膜狀的載體，並有塑膠材質的把柄與封套，可將卵子置放在上，且體積僅為 0.1μL。Cryotop 也被其他研究者有效的使用於冷凍保存卵子與胚胎。這些研究文獻指出，其可有效的讓卵子冷凍解凍後，存活並成功受精發育形成胚胎。

在 2008 年的此篇文獻中，利用 cryotop 冷凍捐贈者的卵子，來評估經由玻璃化冷凍解凍後，卵子存活率、受精率、分裂率與胚胎發育率，與新鮮卵子的差異。這個研究可讓我們進一步了解到 cryotop 是否能合適的應用在生殖細胞銀行冷凍卵子的技術。

文中利用參與試驗的捐卵女性與受卵婦女作為研究對象。結果發現，231 顆成熟的卵子經由玻璃化冷凍解凍後，有 224 顆卵子存活，存活率為 96.6%。利用顯微注射受精後，有 171 顆卵子受精，受精率為 76.3%，然而對照組新鮮卵子的受精率 82.2%，兩者之間沒有顯著差異。而在受精異常率與 DG 率兩者皆相似（Table 2）。

觀察解凍後卵子後續發育情形發現，解凍後卵子中有 94.2% 的受精卵可正常發育至 day 2，而新鮮卵子則有 97.8% 的正常分裂率，兩組之間沒有顯著差別。在 day 3 的分裂率、細胞數與胚胎品質，也同樣沒有明顯差異。而在囊胚發育率，兩者的數據也極為相似（48.7 v.s 47.5 %）（Table 3）。進一步利用照片作紀錄也發現，解凍後卵子與新鮮卵子之間，其發育胚胎中的細胞數並無明顯差異，且生長至囊胚期時，兩組的胚胎型態上也沒有明顯差別。

研究者進一步分析臨床懷孕結果。將 23 對經由冷凍解凍的卵子會做為胚胎植入的夫妻，與一對接受新鮮卵子所發育而成的胚胎進行植入夫妻，以及另外 4 對以新鮮與冷凍卵子混合植入的夫妻互相進行比較。發現平均每對夫妻植入 2 顆胚胎。在冷凍組中的臨床懷孕率為 65.2%，而新鮮組僅一對夫妻並有懷孕，另外混合組則有 50% 的懷孕率。而著床率方面，在冷凍組為 40.8%，新鮮組為 100%，混合組為 25%。在多胞胎率中，冷凍組為 23.8%，新鮮組為 100%，混合組則沒有多胞胎的產生。但是在冷凍組中仍然可見到 20% 的著床失敗率與 6.6% biochemical pregnancy rate（Table 4）。

雖然玻璃化冷凍技術有高濃度冷凍保護劑對細胞造成毒性，以及降溫速率未達成時，造成不可逆冷凍傷害等缺點。現今已利用多種冷凍保護劑的結合，以分散其各別的毒性，並讓其濃度能維持進行冷凍時形成玻璃化均質狀態的功效；再經由冷凍載具的改善，大大的避免了這兩種可能的傷害。而玻璃化冷凍過程，就是利用 Cryotop 透明且成薄膜狀的載體，藉由相當小的體積，以達到快速跨越冰晶容易形成的溫度區域（15℃~-5℃之間）。除此之外，也有效的提高了解凍的回溫速率，避免在解凍過程中也有可能產生的冰晶。而另一項優勢就是可降低滲透性強的冷凍保護劑濃度少於30%，進而減低其對細胞的毒性。因此此篇研究中，能夠有效的增加冷凍解凍速率，並降低冷凍保護劑的濃度，而達到降低在冷凍解凍過程對卵子造成的傷害。

這篇文獻中所獲得的卵子解凍後之存活率、受精率、胚胎分裂率、囊胚形成率等等後續發育能力都有相當好的成績，都是令人相當羨慕與值得學習的，也讓人開始對冷凍卵子的方向開始持樂觀態度。

預約 e-stork 的卵子冷凍服務http://www.e-stork.com.tw/cryo_ovum.vm ，諮詢專線:  0800-668-728