解凍卵子之受精率及胚胎發育  

更新時間:2010-03-16
by Ian

現代知識水平提升,也造成晚婚比率上升,然而女性卵巢功能卻隨著年齡增加而遞減,大於35歲以上尤其明顯,加上現代人緊湊的生活步調、工作壓力以及環境荷爾蒙影響,這個35歲的分界點,往後可能還有下修的趨勢。因此,冷凍卵子技術應運而生,為生殖醫學科技相當重要的領域,在女性生育保存上更是不可或缺的技術。

近幾年來,卵子冷凍的方法從慢速冷凍進階到玻璃化快速冷凍,除降溫速率的增加外,也減少冷凍保護劑的體積,使冰晶形成率降至最小,減低冰晶對胚胎或卵子細胞結構的影響,對於解凍後的胚胎及卵子存活率大為增加。

在義大利2004年3月至2009年5月年間,義大利法規在生殖醫學的規範:

  1. 同一週期不能有超過3顆卵子可以施行體外受精。
  2. 所有受精後形成的胚胎都必須植回母親的子宮腔。
  3. 冷凍胚胎及配子捐贈行為是不能進行的。

基於上述的規定,冷凍卵子便是義大利的各家IVF生殖中心當作常規施行的技術。

為了評估玻璃化快速冷凍方式對卵子冷凍的成效,義大利羅馬的一家生殖中心,將同一週期取出的卵子,分為新鮮及冷凍兩組。冷凍組是先將卵子冷凍起來(因上述法規規範),解凍後施行ICSI,新鮮組則是將新鮮卵子施行ICSI,比較其兩組在後續胚胎的發育情況是否有差別。

研究的對象共有40人,年齡都小於42歲,取卵顆數至少有6顆以上成熟卵子,為排除不好的精蟲對胚胎發育的影響,這40人的男性配偶其精液處理後具有活動力精蟲的濃度至少每ml有50萬隻以上。

受試對象接受打針刺激卵泡發育,並於注射破卵針後35小時進行取卵,37至40小時後,將取出的卵子進行卵丘細胞移除(Denudation),之後便交由電腦進行亂數編號,被編到1, 2, 3號的卵子進行新鮮週期的ICSI,其餘的卵子則進行玻璃化冷凍。冷凍組在解凍週期,也就是在自然週期的卵泡成長至平均大小為17至18mm時施打破卵針,並在施打破卵針後36至40小時進行解凍卵子,在37℃環境體外培養2小時,待紡垂體恢復(Spindle recovery)後,再進行ICSI。不管是新鮮組或冷凍組,都於受精後44至48小時植回子宮腔內。

在這受試對象的40人,年齡為26到42歲,平均年齡為35.5歲。每位對象都在新鮮組週期做了3顆顯微受精。其餘則冷凍保存,共冷凍了251顆卵子,平均一人有6.3顆卵子被冷凍起來。在新鮮組的這120顆卵子,共有100顆受精,受精率為83.3%,平均每人植入了2.5顆胚胎。

  Patients included (N=40)
Female age 35.5 ± 4.8
Baseline FSH (mU/mL) 6.44 ± 3.1
Previous IVF attempts 0.58 ± 1.0
GnRH agonist long protocol 31/40 (77.5)
Antagonist protocol 9/40 (22.5)
Days of stimulation 10.8 ± 1.95
Total gonadotropin amount IU 2201.65 ± 765.7
Number of CCOCs retrieved 13.3 ± 4.5
Number of MII oocytes 10.7 ± 3.6
Number of MII oocytes vitrified 6.3 ± 2.8
CCOC, cumulus corona oocyte complex; MII, metaphase II.

在冷凍組方面,共有124顆卵子被解凍,有120顆存活,卵子解凍存活率為96.7%,這120顆做顯微受精,共有95顆受精卵,受精率為79.2%,最後植入了93顆胚胎,每個植入週期的臨床懷孕率為38.5%。

  Patients included (N=40)
Number of warmed oocytes 3.1 ± 0.30
Number of embryos transferred 2.3 ± 0.88
Number of embryo transfer performed 39/40 (97.5)
Clinical pregnancy rate per cycle 15/40 (37.5)
Clinical pregnancy rate per transfer 15/39 (38.5)
Ongoing pregnancy rate per cycle 12/40 (30.0)
Ongoing pregnancy rate per transfer 12/39 (30.8)
Implantation rate 19/93 (20.4)
Ongoing implantation rate 16/93 (17.2)

另外,此篇報告也在第2天的胚胎形態做比較,共分為極好、好、不好三個等級。新鮮組的極好胚胎率為52%,冷凍組的極好胚胎率為51.6%,顯示出卵子經冷凍解凍後,其胚胎發育並不會受到影響,跟新鮮組相當。

Table III. Primary and secondary outcomes measures: fertilization, pronuclear morphology, embryo development and embryo morphology of fresh and vitrified sibling oocytes
  Fresh ICSI Vitrified/Warmed ICSI
Fertilized per sibling oocyte 100/120 (83.3) 95/124 (76.6)
Fertilized per injected oocyte 100/120 (83.3) 95/120 (79.2)
Normal 2PN morphology 96/100 (96.0) 86/95 (90.5)
1PN 3/120 (2.5) 6/120 (5.0)
3PN 1/120 (0.83) 2/120 (1.66)
Degenerated oocytes post-ICSI 1/120 (0.83) 4/120 (3.34)
Day 2 embryo development 100/100 (100) 93/95 (97.9)
Excellent quality embryos 52/100 (52.0) 49/95 (51.6)
Good quality embryos 38/100 (38.0) 41/95 (43.2)
Fair/poor quality embryos 10/100 (10.0) 3/95 (3.16)

在義大利法規限制卵子受精顆數的情況下,冷凍卵子是必要的技術。經由玻璃化快速冷凍方式,其解凍存活率可高達95%以上,在受精率及好胚胎形成率也可以和新鮮週期的卵子不相上下。其臨床懷孕率也可達到38%,雖然和新鮮胚胎及冷凍胚胎植入週期的懷孕率還有段差距,但已顯現出,卵子冷凍技術,從慢速冷凍進展到玻璃化快冷凍,已有長足的進步。

以往的慢速冷凍時期,因受限於卵子解凍存活率,只有在進行IVF取卵當天,先生因故無法取出精子時,才會將取出的卵子先冷凍保存。隨著玻璃化冷凍技術的進展,卵子冷凍漸漸可成為女性生育保存的利器,不管是計畫延後懷孕的年輕女性、或因癌症治療需先將卵子保存以利未來的生育卵子受贈將可隨時提領卵子銀行裡的卵子、因打針刺激的卵子數目過多,先冷凍一部份卵子...等等。卵子冷凍將可提供愈來愈多層面的保障。

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